zhwm1979的博客

像其它的谷物一样，按照Shull等^[4]对醇溶蛋白的命名法，基于各醇溶蛋白的溶解性，分子重量和蛋白质免疫学，又可以将高粱醇溶蛋白分为α-醇溶蛋白，其相对分子量为25000和20000Da，β-醇溶蛋白，其相对分子量为20000、18000和16000Da和γ-醇溶蛋白，其相对分子量为28000Da。其中α-醇溶蛋白占整个高粱醇溶蛋白的66%～84%，β-醇溶蛋白占7%～8%，γ-醇溶蛋白占9%～12%^[1]。

1. 高粱醇溶蛋白的提取  

高粱醇溶蛋白提取的方法很多，最有代表性而又比较先进的方法主要有如下三种。根据采用的提取方式和目的的不同，其提取的过程和繁琐程度也不一样，所分离得到的产物也不一样。

1.1第一种方法是利用1mL含有1%的十二烷基硫酸钠（SDS）、2%的β-巯基乙醇（β-ME）、pH为10.0的12.5mmol/L的硼酸盐溶液对50mg高粱粗粉中的总蛋白质量按照Hamaker等人所描述的方法进行提取^[2]。高粱醇溶蛋白则按照Hamaker等所描述的方法将总蛋白质提取出来之后被分离，清蛋白和球蛋白则按照Bean 和Lookhart所描述的方法进行提取。在清蛋白和球蛋白被按照Bean 和Lookhart所描述的方法提取出来之后，采用1%SDS、12.5mmol/L硼酸盐、pH10、添加有2%的β-巯基乙醇（β-ME）对谷蛋白进行提取，同时利用含有60% 叔丁醇和2%β-巯基乙醇（β-ME）的溶液按照Bean等所描述的方法对高粱醇溶蛋白进行提取。

1.2第二种方法是利用热的乙醇作为溶剂，按照Carter和Reck等所描述的方法将高粱麸质中的蛋白质提取出来。高粱麸质是按照Buffo等^[3]所描述的实验室湿磨法而得到的。在对高粱麸质中的蛋白质进行提取之前，先利用己烷作为溶剂，采用索氏提取器对高粱麸质进行至少6小时的回流脱脂处理。按照1：5（w/w）的比例将经过脱脂的高粱麸质和95%的乙醇置于500mL的烧瓶中，在65℃下，在水浴锅中采用水力搅拌器对它们的混合液剧烈地搅拌1小时。采用定量滤纸和Buchner漏斗对所得的浆液进行真空抽滤，然后添加过量的蒸馏水所得到的桔色过滤液中以便于诱导高粱醇溶蛋白发生沉淀。再将这种溶液冷藏（-5℃）一整夜以加强高粱醇溶蛋白的沉淀作用。高粱醇溶蛋白通过4，000×g下离心10min进行回收，用蒸馏水洗和再离心除去残留的乙醇。在50℃下，利用空气对流式干燥炉对所得到的溶液干燥4～5小时即可得到高粱醇溶蛋白。最后利用研磨器对干燥的高粱醇溶蛋白进行研磨处理即可。